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郭金金:普通PCR 为什么只有引物二聚体没有目的条带?

2020-8-10 20:22| 发布者: admin| 查看: 50| 评论: 0

摘要: 胡启智的回答: 那可能你的条件不是很适合,所以没有P出来,你可以改变模板的浓度,还可以改变退火温度,还可以加入Mg ,DMSO等。 潇湘妃子的回答: 如果实验目的只是基因型鉴定,对pcr产物无其他要求的话,二聚体并 ...

胡启智的回答:

那可能你的条件不是很适合,所以没有P出来,你可以改变模板的浓度,还可以改变退火温度,还可以加入Mg ,DMSO等。

潇湘妃子的回答:

如果实验目的只是基因型鉴定,对pcr产物无其他要求的话,二聚体并非不能忍受,可以尝试以下方法优化反应条件: 1.确定dna模板为阳性,即确定含有目标序列; 2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有目标条带,即使可能并不清晰; 3.选取最清晰的温度,在pcr体系中设置镁离子浓度梯度,选取最理想的条件。 如果是以前曾经成功扩增、现在条件一样却没法重复的,个人经验要特别注意下模板dna的质量、尤其是ph值。另外由于不清楚您实验的细节、所用试剂和反应条件,如有误解还请见谅...

张 阳的回答:

引物不好 模板不好 退火温度不合适


鲜花

握手

雷人

路过

鸡蛋

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