陈兴波的回答：条带短，能结合的EB（或其他染料）就少，所以相对长片段亮度就很弱，一般小于500就很难看清。 解决方案，基本上楼上的都提到了： 1.提高琼脂糖凝胶浓度到2%-3% 2.跑个单酶切对照，有差异就表示有连接进去。不过如果是要回收目的片段，建议还是用载体上的序列PCR扩增，而且回收小于400bp的DNA不太容易呵 章旭的回答：条带短，能结合的EB（或其他染料）就少，所以相对长片段亮度就很弱，一般小于500就很难看清。 解决方案，基本上楼上的都提到了： 1.提高琼脂糖凝胶浓度到2%-3% 2.跑个单酶切对照，有差异就表示有连接进去。不过如果是要回收目的片段，建议还是用载体上的序列PCR扩增，而且回收小于400bp的DNA不太容易呵 郑矾的回答：你加marker了吗？看看marker不就知道了。说不定是已经跑出去了。。。 刘译泽的回答：用2%的agarose gel ,跑梯度 5 10 15ul 建议PCR之后再跑，可能酶切 的量太低 琼脂糖分辨差 淘汰。的回答：α-脂蛋白、前β-脂蛋白和β-脂蛋白 原因太多了. 可能是双酶切没有切下来; 可能是电泳时间过长已经跑出去了或者根本就回收错了或者回收操作出问题了(胶回收试剂盒里面的试剂可能过期或者失效了); 可能是t4连接酶有问题; 可能是转化过程有问题(感受态细胞没有作好或是电击时间过短); amp平板也可能出问题; 培养过程中出了问题.
你看,有这么多环节,只要那一步出了问题,都做不出来! 所以,每一步都要注意,都要小心.
我建议每一步都要做检验. 例如,双酶切之后,要取部分出来pcr,再电泳检测; 用t4连接酶连接之后,也要电泳检测,最好用到对照; 感受态细胞最好制备好了之后马上就用,不要放置过久; amp平板也最好是用最近才配制的,时间长了也不好.
就这些,希望可以帮到你啊! |
